为何要用iptg诱导外源细胞的表达?其原理是什么?能,培养大肠杆菌的工作总结及心得体会
1、为何要用iptg诱导外源细胞的表达?其原理是什么?能
IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,1旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专1诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。但是IPTG价格高,且有毒性,限制了其工业化大生产。
2、培养大肠杆菌的工作总结及心得体会
1. 发酵罐性能测试,平行性测试,熟悉发酵罐的特征 首先需要对发酵罐的整体性能进行测试,考察各个监控参数,各种测量仪器(温度等电极)的稳定性。另外,需要对4个罐的平行性进行测试,保证今后4个罐不同的结果不受本身罐体差异的影响。 2. 重复性测试 例如A罐,3个批次是否具有可重复性。保证今后的发酵过程中的稳定性。 3. 种子优化 种子优化计划采用4连罐中的某个罐作为种子罐,其它3个作为发酵罐。主要包括种子培养基优化,接种量和接种时机优化。其中,种子培养基最为关键,以后大规模生产时,摇瓶各个阶段都采用LB培养基,发酵罐前1个为种子罐,其培养基的确定可能需要根据最终发酵培养基来确定,原则是与发酵培养基大致相通,成。
3、TA克隆的定义是什么?
T-A克隆法就是用改良碱裂解法抽提pBluescript SK(+)质粒,用EcoRⅤ将pBluescript SK(+)质粒切成平端,利用Taq DNA聚合酶及dTTP制备pBluescript SK(+) T-A载体. 将β-actin cDNA片段克隆入自制的pBluescript SK(+) T-A载体,经EcoRⅠ及HindⅢ双酶切得到与设定长度1致的β-actin cDNA片段. 对PCR产物进行克隆是分子生物学领域以及基因工程领域里常用的方法. 以前对PCR产物进行克隆实验, 采用的方案有以下几种:1是将PCR产物切成两端平齐的双链DNA,然后克隆到切成平端的质粒载体上, 或在PCR产物的两端加上人工接头(linker),经限制性内切酶。
4、大肠杆菌E.coli JM109与BL21(DE3)各有什么特点?在
E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ Genotype E.coli JM109 recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F'[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15] ■ 细胞浓度 1~2×1010 Bacteria/ml ■ 保存 -80。
5、有谁能详细说1下全基因组Bisulfite Sequencing的流
亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing) 直接测序法是建立在MSP基础上进1步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法。重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后,对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法1种可靠性及精确度很高的方法,能明确目的片段中每1个CpG位点的甲基化状态。在寻找有意义的关键性CpG位点上,有其他方法无法比拟的优点。测序法以CpG岛两侧不含CpG点的1段序列为引物配对区,所以能够同时扩增出甲基化和非甲基。