液态色谱仪使用方法？全自动微量水分测定仪的调试步骤是怎么样的？

1、液态色谱仪使用方法？

液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱及液-固色谱。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。液相色谱仪操作过程　　
1、开机操作：　　
1、打开液相色谱仪电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server(1般启动时已打开);　　
2、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时(有6行字符)，打开工作站(先打开Online);　　
3、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽)，控制流量大小，以能流出的Z小流量为准;　　
4、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于Zdi限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液;　　
5、使用过程中要经常观察液相色谱仪工作状态，及时正确处理各种突发事件。　　
2、先以所用流动相冲洗系统1定时间(如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相)，正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命。　　
3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果。　　
4、使用液相色谱仪手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液1般选择与样品液1致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡。　　
5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。　　
6、实验结束后，1般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯。　　
7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，Z后自下而上关闭液相色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关。　　
8、使用者须认真履行液相色谱仪使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。液相色谱仪操作注意事项　　
1、液相色谱仪操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色)，1般为漏液，其中1个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击Online操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。　　
2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，Z好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头。　　
3、液相色谱仪操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡)，若还是无法通畅，则需换柱。　　
4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完。　　
5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶。　　
6、液相色谱仪自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时，需重新定位。　　
7、泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换。　　
8、基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡，若用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡)，流动相被污染(更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统)，色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用1根同类的被证明性能好的色谱柱)，检测器不稳定。　　
9、短期有规则的噪声，可能原因为泵压不稳或泵脉冲，调节溶剂不适当(如两种溶剂的互溶性问题)，泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定。　　
10、长期有规则噪声，可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当。　　
11、基线漂移，可能原因为系统不稳或没有达到化学平衡，室温不稳(未使用柱温箱)，流动相污染或分解，柱污染，检测池泄漏，系统泄漏，固定相流失(另选流动相，另选色谱柱)，测定的波长选择错误(对溶剂有吸收)，样品组分保留太长(用强度合适的溶剂清洗色谱柱)，检测器不稳定。　　
12、液相色谱仪每次进样时的保留时间不重复，可能原因为系统不稳或未达到化学平衡，由于气泡、各部件磨损等原因引起的泵压或泵脉冲输液不稳定，进样体积太大或样品浓度太高平衡被破坏，溶剂配比不合适，柱被污染。　　
13、无峰，可能原因为液相色谱仪检测器选择错误，使用错误的流动相，样品降解;　　
14、色谱峰比预计的小，可能原因为进样体积错误，检测器灯故障，进样问题(瓶号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞)。　　
15、峰变宽，可能原因为液相色谱仪进样体积太大或样品浓度太高，过滤器、保护柱入口、柱入口或连接管路有部分堵塞，检测器时间常数设置错误，进样器问题(如阀漏、针头堵塞或损坏)，柱或保护柱被污染，对流动相来说样品溶剂太强，使用错误的色谱柱，温度变化。　　
16、出现双峰/肩峰，可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞，柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡破坏。　　
17、前沿峰，可能原因为进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡破坏，对于流动相来说样品溶剂非极性太强(对于反相柱)，柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效;　　
18、脱尾峰，可能原因为柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，液相色谱仪进样器问题(如阀漏等)，检测器时间常数设置错误。　　
19、出现鬼峰，可能原因为流动相被污染，样品预处理时产生降解或混入杂质，先前进样的流出物，样品定量管清洗不当，注射器脏，柱被污染，进样装置被污染，流动相中含有稳定剂/稳定剂变化。

2、全自动微量水分测定仪的调试步骤是怎么样的？

全自动微量水分测定仪所检测出来的各项指标数值，相对来说都是比较的准确，要想更好地操作和使用设备，简单的调试步骤是不能缺少的。那么为了客户能够更方便快捷的使用，接下来小编就其调试步骤，来简单为大家介绍下。

1、打开箱体后，检查自动微湿度测试仪的附件是否齐全。

2、安装并拧紧固定电解槽夹具（不同类型的夹具不同）。

3、将全自动微量水分测试仪的电解槽从钙塑料盒的小中心取下，取出两个电极，取出烘干管(嵌在钙塑料盒内)、注射旋塞、电解槽瓶塞，并在所有磨床上涂上少量真空润滑脂或瓦西林。

4、注入旋塞中间的硅橡胶垫已安装。注射针1次难以插入。硬针可用于多次插入注射旋塞，或可松开注射旋塞。

5、打开全自动微量水分测定仪的电解液瓶，并将电解液倒入罐瓶下的校准线上方。然后将电解液倒入约2厘米高的电解液电极（带网）中，放置在电池瓶的位置，将白色搅拌棒放入电解液中，以利于电解液的保存，新鲜的电解液为黑色，颜色越深，电解液就越新鲜。

6、测量电极(2根小铂柱细电极)、干燥管、瓶塞和注射旋塞放置在贮罐瓶的相应位置，将电解槽放在主机上，自动微量水分分析仪的整个运行过程将停止与水接触。

7、将电解电极(用网)插入主机的电解插座，将测量电极插头插入主机的测量插座，电解槽就位后，插入左右两侧。

8、打开主机后面的电源开关，打开主面板上的电解开关，打开搅拌开关，调节全自动微量水分测定仪搅拌速度调节旋钮，使液位有小漩涡，不要太快，打不开混合物会打破电极。

9、用50微升注入器从注入旋塞中抽出10微升水，并将针头钉在液位下方。注：第1次可能很紧，可以用手握，不能让针弯曲。重复地，10微升的水被50微升的取样器从注入旋塞泵入电解液。每次您进入，观察颜色变化的间隔为10秒。当颜色变成棕色和红色时，注入量减少到1升水。同样，每次进入，间隔10秒，观察颜色变化。当颜色变成浅黄色时，绿灯亮起并开始计数，停止取水。

10、新平衡的电解液，罐瓶呈黄色，电解电极暗，几小时后自然变淡，电解电极和电池瓶的液位不1样没关系。正常使用几个小时后，它会自动变为相同的高度。

11、当全自动微量水分测定仪计数到终点时，停止计数，端灯亮，蜂鸣器响，即可找到电解液平衡点，确定正常样本，为了在样品正常测定前确认仪器、电解液和电解液整个系统的正常和准确，用0.5微升采样器校准0.5微升针入纯水，注入0.1微升水观察全自动微量水分测定仪，显示范围为90-110微克，显示全自动化。全自动微量水分测定仪是正常的，可以正常使用。回复者：华天电力。

3、安捷伦气相色谱仪自动点火点不着，怎么办

可直接用火点，不必设置。也可用微量注射器向里面注射1ul酒精连续用仪器点火。最好先检查1下氢气、压缩空气是否漏气或用完。

4、微量水分测定仪的安装步骤是什么？

微量水分测定仪的安装步骤如下：

请点击输入图片描述

（1）检查配件是否齐全。 （2）用（不同类型的夹具）夹紧固定电解槽，在主机上安装并拧紧。 （3）将电解槽从钙塑盒中取出，取出两个电极、1根干燥管（嵌入钙塑盒内）、1个取样塞门、1个电解槽瓶塞，在各研磨点涂上少许真空润滑脂或凡士林即可使用。 （4） 安装了样品注入旋塞中间的硅橡胶垫。当插入样品注射针时，难以打结。硬针可多次使用，或可松开注射旋塞。 （5）打开电解液瓶，将电解液倒入电池瓶下刻度线以上，电解液注入电解质电极（带网），高度约2厘米，放置在池瓶的位置，白色搅拌棒放入电解槽溶液中保存电解液，新鲜电解液为黑色，颜色越大，电解液越新鲜。 （6）测量电极（带两个小铂气瓶的细电极），干燥管，瓶塞和注射塞放置在罐瓶的相应位置。 （7）将已安装的电解槽放在主机上，停止整个操作并与水接触。将电解电极的插头（带网）插入主机的电解插座，将测量电极插头插入主机的测量插座。 （8）电解槽就在左边，右边插在右边。将电解电极的插头（带网）插入主机的电解插座，将测量电极插头插入主机的测量插座。 （9）电解池刚离开左边，右边插入右边。用50微升的注射器从注入塞门中泵出10微升的水，并将针头固定在液位以下。注意：第1时间可能非常紧，可以用手握住，不能让针头弯曲。重复地，10微升的水由50微升采样器从注入塞门泵入，注入电解液中。每10秒1次，观察颜色变化。当颜色变为棕色红色时，样品量降低至1微升水。每次进入时，应干预10秒以观察颜色变化。当颜色变为淡黄色时，绿灯将亮起并开始计数。新的平衡电解质将停止供水。电池瓶是黄色的，电解电极是黑色的。几个小时后，它自然会变成浅黄色。电解电极和电解槽的液位不像液位那么高，几小时后可以自动改变到相同的高度。 （10）计数到终点，停止计数，端灯亮，蜂鸣器响，即可找到电解质平衡点，即可测定正常样品。在样品正常测量之前，为了确定整个微量水分测试仪系统、电解槽和电解液的正常和准确，用纯水校准了0.5微升的针，用0.5微升的样品注射器观察了仪器的精度，在0.1微升的水中观察了仪器的准确度，结果表明仪器的准确度在90至110微克之间，表明仪器是正常的，可以正常使用。回复者：华天电力

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5、什么是微量热技术？

微量热法(包括等温滴定量热和差示扫描量热)是近年来发展起来的1种研究生物热力学与生物动力学的重要结构生物学方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续和准确地监测和记录1个变化过程的量热曲线，原位(in situ)、在线(on-line)和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。微量热法具有以下特点： 1.它不干扰蛋白质和核酸的生理功能，具有非特异性的独特优势，即对被研究蛋白质和核酸体系的溶剂性质、光谱性质和电学性质等没有任何限制条件。2.样品用量小,方法灵敏度高，测量时不需要制成透明清澈的溶液。3.量热实验完毕的样品未遭破坏，还可以进行后续生化分析。4.微量热法缺乏特异性。但由于蛋白质和核酸本身具有特异性，因此这种非特异性方法有时可以得到用特异方法得不到的结果，这有助于发现新现象和新规律。微量热法在生物大分子研究中的应用主要有： 1.酶促反应 2. 蛋白质去折叠/折叠 3.抗原-抗体相互作用 4.分子伴侣-底物相互作用 5.药物-核酸相互作用 等温滴定量热法（Isothermal Titration Calorimetry，ITC） 实验是通过滴定反应物到含有反应所必须的另1反应物的样品溶液中。每次滴定后，反应热放出或吸收，这些都可以被ITC所检测到。检测到的热效应的热力学分析提供了结合反应相关的能量过程的定量特征，可以直接测量与常温下发生的反应过程相关的能量学参数。1 ITC的特点 ITC能测量到的热效应最低可达125 nJ，最小可检测热功率2 nW，生物样品最小用量0.4 μg，而且这些年来ITC的灵敏度得到了提高，降低了响应时间（小于10 s）。ITC不需要固定或改变反应物，因为结合热的产生是自发的。获得物质相互作用完整的热力学数据包括结合常数（Ka）、结合位点数（n），结合焓（△H）、恒压热容（△Cp）和动力学数据（如酶促反应的Km和kcat）。ITC也比那些选择分析方式（如分析型超速离心法，AUC）快，1个单纯的AUC实验需要几个小时甚至几天去完成，而典型的ITC实验只需30~60分钟，在加上几分钟的响应时间。整个实验有计算机控制，使用者只需输入实验的参数（温度、注射次数、注射量等）计算机就可以完成整个实验，再由Origin软件分析ITC得到的数据。其精确度高以及操作简单。

6、怎么调节微量水分测定仪卡尔费休试剂的平衡？

微量水分测定仪也称为卡尔费休水份测定仪，电解槽中新加入的卡尔费休试剂处于过碘状态，呈棕黑色或棕红色。必须向试剂中注入适量的水，使过量的碘发生反应。这就要求我们快速调整微量水分测定仪试剂的平衡。具体方法是什么？

1.将主机后面板上的电源插座连接，通过电源线连接交流220V电源，打开电源开关，然后开启搅拌和电解开关（启动时需要打开搅拌，然后打开电解。否则容易造成碘现象，影响测试结果的准确性）。

2.调整混合速度调节按钮，形成阳极室中卡尔费休试剂t的小涡流。

3.蒸馏水用50 mU L微量注射器提取，并将样品注入旋塞的注入口缓慢注入电解槽多次(需将针浸入卡尔·费舍尔试剂的液位)，同时观察卡尔费休试剂在阳极室中的颜色变化(因为蒸馏水的注入颜色较浅)。在微型注射器中充分注入蒸馏水后，若不将卡尔·费舍尔试剂的颜色改为淡黄色，则可重复上述操作，当阳极室卡尔费休试剂颜色变为淡黄色，显示器开始计数时，停止注入蒸馏水。

调节卡尔费休试剂的平衡操作。当卡尔费休试剂刚刚平衡时，电解电极中卡尔费休试剂的颜色仍然是暗的，其中的碘会通过陶瓷板的半透膜渗透到阳极室中，造成碘过量的现象，这将影响测量数据的准确性。注射前可用0.5μl微量注射器注入少量蒸馏水，使过量碘发生反应，再次达到终点后立即注入样品，可减少误差，2～6小时后，电解电极中卡尔费休试剂的颜色将自动变为淡黄色。

卡尔费休试剂的平衡是微量水分测定仪的重要组成部分。如果试剂不平衡，分析仪测试结果不准确。因此，为了更准确地得到检测结果，必须调整试剂平衡。

回复者：华天电力。